1. Питьевая вода.
В питьевой воде возбудители инфекционных заболеваний, в т.ч. и брюшного тифа, могут находиться в небольшом количестве, что обуславливает необходимость исследовать большие ее объемы - 2-3 литра. С целью повышения эффективности исследования необходимо применять методы концентрирования. При исследовании питьевой воды на наличие возбудителей брюшного тифа и паратифов рекомендуется использовать один из следующих методов концентрирования: метод
мембранных фильтров или метод осаждения.
1.1. Метод мембранных фильтров.
1.1.1. Выполнение анализа.
Подготовка мембранных фильтров и фильтровального аппарата к работе, фильтрование воды производят по ГОСТу 18963-73. После окончания фильтрования воронку снимают, фильтр осторожно фламбированным пинцетом переносят в емкость с 50-100 мл среды накопления. Рекомендуется использовать две среды накопления:
1) селенитовый бульон;
2) среда с охмеленным суслом.
1.1.2. Засеянные среды накопления инкубируют при температуре
37°С в течение 18-20 ч, затем из каждой среды накопления делают
высевы бактериологической петлей на 3 чашки с висмут-сульфит агаром.
Чашки с посевами инкубируют 20-24 ч при температуре 37°С, а в случае
отсутствия роста - еще 24 часа.
1.1.3. С каждой чашки снимают на дифференциально-диагностические среды (Олькеницкого или Ресселя) по 3-5 подозрительных на возбудителей брюшного тифа и паратифов колоний. Как правило, на висмут-сульфит агаре это колонии черного
цвета с характерным металлическим блеском, при этом наблюдается прокрашивание участка среды под колонией в черный цвет. S.paratyphi A могут образовывать светлые или зеленоватые, нежные колонии. Засеянные дифференциально-диагностические среды инкубируют 18-20 часов при температуре 37°С.
1.1.4. Дальнейшее изучение отобранных колоний производят в
соответствии с "Методическими указаниями по микробиологической
диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями" (МЗ СССР,
1984).
1.2. Метод осаждения.
К 3 л исследуемой воды добавляют 9,0 мл 10-процентного водного раствора соды питьевой и 10,5 мл 10-процентного раствора соли Мора. Оба раствора должны быть стерильны. Все перемешивают и оставляют в покое при комнатной температуре на 18-24 часа. Затем осторожно, не взмучивая осадка, при помощи стерильного резинового шланга и груши сливают надосадочный прозрачный слой жидкости. Осадок вместе с оставшейся жидкостью (около 150-250 мл) засевают в среды накопления:
селенитовый бульон двойной концентрации (соотношение среды накопления и исследуемого осадка 1:1) и среду с охмеленным суслом (соотношение среды накопления и исследуемой пробы 1:1).
Дальнейший ход исследования - по пп.1.1.2, 1.1.3, 1.1.4.
Если по каким-либо причинам нет возможности использовать методы концентрирования, то исследуемую водопроводную воду (2-3 л) следует разделить на 4-6 объемов по 0,5 л и к 2-3 объемам добавить сухой селенитовый бульон в соответствии с прописью на этикетке, а к другим 2-3 объемам по 0,5 л добавить среду с охмеленным суслом (соотношение исследуемой воды и питательной среды 4:1).
Дальнейший ход исследования - в соответствии с пп.1.1.2, 1.1.3, 1.1.4.
2. Вода поверхностных водоемов.
Для обнаружения возбудителей брюшного тифа и паратифов в воде
водоемов необходимо исследовать 1 л на двух средах накопления
параллельно. К объему исследуемой воды 0,5 л добавляют 0,5 л
селенитового бульона двойной концентрации, тщательно перемешивают и
полученный объем 1 л делят на две части. К оставшемуся объему 0,5 л
исследуемой воды добавляют 125 мл среды с охмеленным суслом,
перемешивают и также делят на 2 части.
Дальнейший ход исследования - в соответствии с пп.1.1.2, 1.1.3,1.1.4.
3. Сточная вода.
При исследовании сточной воды значительные трудности представляет наличие большого количества посторонней микрофлоры. С целью снижения ее содержания рекомендуется исследуемый объем сточных вод 100 мл развести в 10 раз стерильной водопроводной водой. После чего полученный объем 1 л исследовать так же, как воду водоемов. Параллельно с посевом на среды накопления можно сделать прямой высев сточной воды на висмут-сульфит агар.
4. Питательные среды.
4.1. Среда с охмеленным суслом.
Охмеленное сусло, отобранное на пивоваренном заводе с соблюдением правил асептики в стерильную посуду, хранят в холодильнике при 4°С до 3-4 недель.
Среду с охмеленным суслом готовят ex tempore следующим образом:
