Для обеспечения специфичности в анализе используют два типа моноклональных антител, один из которых специфичен к бета-субъединице, а второй - к альфа-субъединице гормона. Если для связывания применяют моноклональные антитела к альфа-субъединице, то на мембране кроме hCG также будут специфически сорбироваться другие гормоны, альфа-субъединицы которых дают перекрестную реакцию с альфа-субъединицей hCG. В этом случае специфичность определения hCG не изменится, однако благодаря «хук» - эффекту может оказаться заниженной. Это явление обусловлено тем, что при высоких концентрациях другие гормоны могут конкурентно занимать активные центры антител, в результате чего сигнал получится заниженным. Поэтому предпочтительнее антитела против бета-субъединицы иммобилизовать на мембране, а антитела против альфа-субъединицы конъюгировать с' ферментом.
В литературе описано несколько других вариантов метода иммунофильтрации. В одном из них антитела иммобилизуют не непосредственно на мембране, а на гранулах, расположенных на поверхности или внутри мембраны (рис. 3). Гранулы с иммобилизованными антителами могут быть помещены на фильтр заранее или непосредственно перед проведением анализа. Преимуществом последнего варианта является возможность смешивания и подбора различных реагентов и фильтров.
Другим преимуществом метода иммунофильтрации является простота положительного контроля. Контроль может быть зависимым или независимым от определяемого вещества. В первом случае hCG просто иммобилизуют на определенном участке мембраны для регистрации положительной активности конъюгата. Во втором случае на каком-либо участке мембраны иммобилизуют антитела против фермента, с которым конъюгированы вторые антитела к определяемому веществу; здесь связывание фермента с этими антителами не должно влиять на его активность. Преимуществом положительного контроля, не зависящего от определяемого вещества, является возможность подбора таких антител к конъюгированному ферменту, стабильность которых совпадет со стабильностью антител, используемых для связывания антигена из пробы. Таким образом, будет осуществляться одновременный контроль как активности иммобилизованных антител, так и активности конъюгата. Недавно в продаже появилась модифицированная аналитическая система для количественного определения hCG. В ее состав входят два стандарта и считыватель ICON.
