Реакция агглютинации, т.е. сшивание антиген-сенсибилизированных клеток или частичек с помощью соответствующих антител, известна уже давно и детально описана в иммунологической литературе. Агглютинационные тесты можно использовать для определения как антигена, так и антитела в зависимости от того, какой реагент связывается с твердой фазой. Известен прямой и конкурентный варианты реакции.
Большинство домашних аналитических систем для обнаружения беременности основано на ингибировании реакции гемагглютинации. В таких тестах смешивают эритроциты, сенсибилизированные hCG, специфические антитела и пробу мочи, в которой необходимо определить hCG. При наличии в пробе hCG неаттлютинирующие клетки скатываются по стенкам пробирки вниз и образуют на дне красное кольцо. При отрицательном результате клетки за счет агглютинации остаются в суспензии.
Агглютинационные тесты очень хорошо подходят как для самодиагноза, так и для лабораторий при кабинете врача, поскольку они очень просты и не требуют никакого оборудования. Однако по чувствительности они сильно уступают иммуноферментным методам анализа, так как в них сигнал не усиливается. К тому же интерпретация полученных данных довольно субъективна, а сами агглютинационные тесты подвержены случайным механическим воздействиям, сотрясениям, которые могут разрушать образующиеся структуры и приводить к неправильным результатам. Кроме того, при наличии в пробе ревматоидного фактора или молекул типа белка А возможна неспецифическая агглютинация. Подобные белку А вещества наиболее опасны при диагностике инфекционных заболеваний, поскольку они имеются на поверхности многих обычных микроорганизмов.
Иммунофильтрация. Под иммунофильтрацией понимают определение вещества методом иммуноанализа после его выделения из пробы фильтрацией через полупроницаемую мембрану. В наиболее простом варианте антиген удерживается мембраной неспецифически, только благодаря определенному размеру ее пор. Далее его определяют с помощью конъюгата фермент - антитело. Этот метод использован для определения ассоциатов вирусов с клетками, однако он не применим к растворимым антигенам или свободным вирусам. В этом случае необходимый антиген специфически связывают с антителами на мембране.
Принцип иммунофильтрации использован в наборе ICON™ для определения hCG. Набор включает полипропиленовый цилиндр с найлоновой мембраной, в центре которой иммобилизованы антитела. Мембрана лежит на диске из пористого полиэтилена. Внутри цилиндр заполнен адсорбентом, например ацетатом целлюлозы. Сначала мембрану смачивают буферным раствором. Затем наносят пробу, которая проходит через мембрану и улавливается адсорбентом. Присутствующий в пробе hCG связывается с иммобилизованными антителами; его обнаруживают добавлением конъюгата фермент - антитело. После отмывки избытка конъюгата добавляют раствор субстрата; при наличии в пробе антигена наблюдается цветная реакция. При положительном результате анализа в центре мембраны появляется голубое пятно.
По сравнению с пассивной сорбцией на твердой фазе в иммунофильтрации связывание антигена с антителом ускоряется примерно в 10 раз и кинетика процессов почти не отличается от кинетики реакций в растворах. Например, если определение hCG с чувствительностью 50 ед./л по ингибированию агглютинации занимает около 1 ч, то с помощью набора ICON™ это время сокращается до 5 мин. Чувствительность аналитических систем, основанных на принципе иммунофильтрации, зависит от объема наносимой пробы, времени инкубации с коныогатом и субстратом. На чувствительность не влияет концентрация конъюгата, поскольку он берется в большом избытке по отношению к определяемому веществу.
