Для определения групповой принадлежности крови необходимо следующее оснащение; два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток 1(0), 2(А), 3(В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки 4(АВ) (в каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку), флакон с изотоническим раст­вором хлорида натрия с пипеткой, чисто вымытая сухая тарелка, предметные стекла, стерильные копьевидные иглы для прокола мякоти пальца, стерильные марлевые шарики, спирт. Определение проводят в помещении с хорошим освещением и температурой от 15 до 25°С.

Каждая ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-этикетку с указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой без этикетки пользоваться запрещается. Стандартные сыворотки для определения группы крови по системе АВО выпускают с определенной цветовой марки­ровкой: 1(0) — бесцветная, 2(А) — голубая, 3(В) — красная, 4(АВ) — желтая. Соответствующая цветовая маркировка имеется на этикетке в виде цветных полос: на этикетке сыворотки 1(0) полос нет, сыворотки 2 (А) — две полосы синего цвета, сыво­ротки 3(В) — три полосы красного цвета и сыворотки 4(АВ) -четыре полосы желтого цвета. Сыворотки хранят при температуре 4—10°С. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула сохранной. Наличие хлопьев, осадка, помутнение являются при­знаками непригодности сыворотки. Титр сыворотки должен быть не менее 1 : 32, активность— высокой: первые признаки агглютина­ции должны появляться не позднее 30 с. Сыворотки с просрочен­ными сроками хранения к использованию не пригодны.

Тарелку делят цветным карандашом на 4 квадрата и в направ­лении по часовой стрелке обозначают квадраты 1(0), II (А), III (В). В соответствующий квадрат тарелки пипеткой наносят крупную каплю сыворотки двух серий 1(0), 2 (А), III (В) групп. Подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой-копьем. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, после­дующие разными уголками предметного стекла вносят последова­тельно в капли сыворотки и тщательно размешивают. Капля вно­симой крови должна быть в 5—10 раз меньше капли сыворотки. Затем путем покачивания тарелки тщательно перемешивают кровь с сывороткой. Предварительные результаты оценивают через 3 мин, после чего добавляют каплю изотонического раствора хлорида натрия, вновь смешивают путем покачивания тарелки и через 5 мин проводят окончательную оценку реакции агглюти­нации.

При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зер­нышки из склеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрач­ные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен. Возможны следующие 4 комбинации реакций агглютинации со стандартными сыворотками 1(0), 2(А), 3(В) групп.

1. Все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации.Исследуемая кровь 1(0) группы.

2. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой 2 (А) группы обеих серий и положительная с сыворотками 1(0) и 3(В) групп. Исследуемая кровь 2(А) группы.

3. Реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой 1П(В) группы в обеих сериях и положительная с сывороткой 1(0) и 2(А) групп. Исследуемая кровь 3(В) группы.

4. Сыворотки 1(0), 2(А), 3(В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит 4(АВ) группе. Но прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой 4(АВ) группы нотой же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к 4(АВ) группе.

Выявление других комбинаций говорит о неправильном опреде­лении групповой принадлежности крови больного Сведения о группе крови больного вносят в историю болезни, делают соответствующую отметку на титульном листе за подписью врача, проводившего исследование, с указанием даты исследо­вания.

Ошибки при определении групповой принадлежности крови возможны в ситуациях, когда при фактическом наличии агглю­тинации она не выявляется или выявляется агглютинация при ее фактическом отсутствии. Не выявленная агглютинация может быть обусловлена:

I) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой агглютинабельностью эритроцитов; 2) избыточным количеством исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке, 3) замедленной реакцией агглютинации при высокой температуре окружающей среды.