Очень важно определять беременность на ранней стадии. Чем раньше женщина узнает о
том, что она беременна, тем раньше она начнет заботиться о себе и своем будущем ребенке.
Биохимические основы
Имеющиеся в продаже наборы для обнаружения беременности основаны на определении быстро возрастающего уровня hCG в моче. hCG начинает продуцироваться развивающимися трофобластами через 4-5 дней после оплодотворения яйцеклетки. Заметные количества hCG не обнаруживаются в сыворотке или моче по крайней мере в течение 7 дней после оплодотворения, но к моменту очередной ожидаемой менструации концентрация гормона достигает 80 - 100 ед./л. hCG является гликопротеином, структурно гомологичным другим гормонам подобного типа. А-субъединицы этих гормонов практически идентичны, в то время как 3-субъединицы специфичны и обусловливают их биологическую активность. Гомология J-субъединиц LH и hCG достигает 80%, однако /3-субъединица hCG имеет дополнительные 30 аминокислотных остатков на С-конце аминокислотной цепи. Антитела против этой части /J-цепи или против двух специфических конформационных эпитопов, образующихся в четвертичной структуре гормона, обеспечивают специфичность определения hCG. Специфичность любого иммуноанализа зависит от характеристик антисыворотки. Самые первые тесты на беременность были основаны на агглютинации. Эритроциты с сорбированным hCG инкубировали с антителами и образцом мочи. В отсутствие hCG эритроциты агглютинировали. Если же в моче находилось достаточное количество hCG, то агглютинации клеток не происходило. Последующие модификации теста включали использование частичек с сорбированными антителами, которые в присутствии гормона образовывали осадок. Однако интерпретировать результаты модифицированных тестов было очень трудно. Более того, на результаты таких тестов влияли механические воздействия, а для проведения анализа требовалось от 1 до 2 ч.
Поликлональные антитела, применявшиеся ранее в тестах на беременность, неизменно давали перекрестные реакции с LH, имеющимся в моче любой женщины, поэтому с помощью этих тестов можно было надежно определять только высокие концентрации hCG. Кроме того, аффинность; специфичность поликлональных антисывороток и содержание специфических антител в них изменялись от партии к партии в широких пределах. Развитие гибридомной технологии получения моноклональных антител позволило решить проблемы, связанные со специфичностью и непостоянством свойств антисывороток. На базе моноклональных антител появилась возможность создания высокочувствительных тестов с использованием не только конкурентных, но и прямых «сандвич» - методов.
Несколько лет назад в продаже появился набор для обнаружения беременности с помощью иммуноанализа на частичках золей. В тесте используется раствор коллоидного золота, красный цвет которого не меняется и при связывании антител. Если частички, на которых сорбированы антитела к hCG, инкубировать с пробой, содержащей гормон, то по мере их агрегации красно-малиновая окраска в течение 30 мин постепенно исчезает. При содержании гормона более 150 ед./л малиновая окраска переходит в серую. В последней модификации этого метода анализ проводится на твердых носителях - дипстиках. Антитела одного типа связаны с полистирольным дипстиком, а второго - сорбированы на частичках золота. Инкубация дипстика с пробой мочи и меченным частицами золота реагентом приводит к образованию розовой окраски на дипстике, если в пробе имеется достаточное количество hCG.
В большинстве наборов для обнаружения беременности, имеющихся в настоящее время в продаже, используются методы типа ELISA, впервые описанные в работе. Этот метод стал активно использоваться в наборах для анализа на дому после появления гибридомной технологии, позволяющей получать в больших количествах специфические, высокоаффинные моноклональные антитела. Во многих из этих методов применяют дипстики, несущие антитела одного типа, и конъюгаты антител второго типа с ферментом в качестве метки. Мембраны могут быть изготовлены в виде полосок из полистирола или из специальной бумаги на пластиковой подложке. Если меткой является щелочная фосфатаза, то используют цветную реакцию с субстратом, например 5-бром-4-хлор-3-индолил-фосфатом, в результате которой на твердой фазе образуется нерастворимый продукт голубого цвета. В случае пероксидазы хрена, как правило, применяют цветные реакции в растворе.
