Следует отметить, что проявление АЦ стимулирующего влияния инсулина и инсулиноподобных пептидов во времени имеет сходство в опытах in vitro и in vivo. АЦ активирующий эффект пептидов отчетливо выявляется при коротких сроках влияния пептида (2,5 и 5 мин) при физиологических концентрациях (10-9-10-8М), с увеличением времени действия эффект пептидов ослабевает или отсутствует.
АЦ активирующий эффект инсулина, ИФР-1 и ИПП при разных концентрациях в условиях in vitro
Установив оптимальное время действия пептидов инсулинового суперсемейства, при котором происходит активация АЦС (2.5 мин), необходимо было выявить при каких концентрациях АЦ стимулирующий эффект пептидов наиболее выражен. В разных тканях стимулирующий эффект пептидов инсулиновой природы осуществляется через специфичные рецепторы, отличающиеся по сродству к пептиду в гомологичных и негомологичных пептиду тканях.
Проведено исследование влияния инсулина, ИФР-1, ИПП моллюска и ЭФР в течение 2.5 мин при разных концентрациях (10-12-10-6М) в мембранных фракциях крыс, кур, моллюсков, а также во фракции, выделенной из культуры клеток куриных миобластов.
В мембранной фракции скелетных мышц крыс стимулирующий АЦ эффект инсулина, ИФР-1, ИПП обнаруживается при концентрациях - 10-11-10-7М (Рис. 8). Наиболее выраженный АЦ стимулирующий эффект составляет: для инсулина +250% при 10-8М; для ИФР-1 +91% при 10-9М; для ИПП +111% при 10-8М; для ЭФР +190% при 10-10М. (Рис. 8).
Можно отметить, что в диапазоне концентраций 10-10-10-7М наиболее четко выражен активирующий АЦ эффект инсулина, эффекты других исследованных пептидов инсулиновой природы проявлялись слабее. АЦ стимулирующий эффект ЭФР проявлялся при более низких концентрациях (10-11-10-10М).
Рис. 8. Базальная активность АЦ принята за 100%. Время действия пептидов 2.5 мин
Таблица 3.
Влияние in vitro разных концентраций инсулина на активность АЦ во фракциях мышечных мембран куриных эмбрионов разного возраста и цыплят
Объекты (возраст) |
10-сут Эмбрионы |
13-сут Эмбрионы |
16-сут Эмбрионы |
Цыплята 3-сут |
Воздействия |
Активность АЦ (пмоль цАМФ/мин/мг белка) В скобках – Активность АЦ (в%) в присутствии инсулина, по отношению к базальной активности, принятой за 100%. | |||
Без Инсулина |
14.02±1.10 (100%) |
3.90±0.45 (100%) |
2.01±0.09 (100%) |
8.52±0.41 (100%) |
+инсулин 10-11 М |
16.34±1.35 (117%) |
4.21±0.34 (108%) |
4.81±0.46 (239%) |
10.11±0.55 (119%) |
+ инсулин 10-10 М |
39.14±1.93 (279%) |
10.33±0.89 (265%) |
5.28±0.30 (263%) |
11.24±0.48 (132%) |
+ инсулин 10-9 М |
48.25±2.21 (344%) |
15.92±1.24 (408%) |
10.24±0.62 (509%) |
14.54±0.82 (171%) |
+ инсулин 10-8 М |
19.87±1.44 (142%) |
9.84±0.56 (252%) |
9.92±0.47 (494%) |
19.55±1.13 (238%) |
+ инсулин 10-7 М |
17.13±0.98 (122%) |
4.93±0.45 (126%) |
7.51±0.33 (374%) |
22.21±1.37 (261%) |
+ инсулин 10-6 М |
17.90±1.12 (128%) |
5.12±0.21 (131%) |
1.95±0.22 (97%) |
24.39±1.62 (286%) |